毛细管凝胶电泳CGE-UV用于分析核酸样品
毛细管凝胶电泳CGE-UV用于分析核酸样品
1. 背景介绍
一种可以通过长度测量核酸分子完整性的高分辨率分析方法对于质量保证、了解药效和优化生产工艺至关重要。毛细管电泳(CE)系统,如核酸片段分析仪,可用于分析各种核酸样品,包括线性化质粒DNA和体外转录RNA等。相比之下,毛细管凝胶电泳(CGE)涉及用分离凝胶(荧光染料基质)填充毛细管,比传统琼脂糖及聚丙烯酰胺PAGE胶电泳繁琐的染色步骤更加环保易于操作,大大提升了分析效率。采用电压进样在毛细管上进行微升级的进样,并使用电泳分离使RNA/DNA片段(结合荧光染料)按大小迁移通过毛细管。对具有确定大小的RNA/DNA片段的参考条带样本进行大小比较。本应用案例中部分实验参照《美国药典》中mRNA疫苗质量控制分析方法进行,分别对小核酸、DNA片段进行了有效的分离。
2. 测试条件
仪器: | CE-1000毛细管电泳仪 | ||
波长: | 280nm/254nm | ||
毛细管内径: | 75um/50um | 有效长度: | 775px(总长1450px) |
样品: | 1. 人工合成的5种小核酸混合样(3000-30000Da) 2. 市售QDL 2,000 Quantitative DNA Marker | ||
运行电压: | 10kV/20kV | ||
进样电压: | 10kV | 进样时间: | 10s |
分离电解质: | CE凝胶(用于RNA和DNA的分析) |
3. 测试结果
1) 客户提供的5种人工合成小RNA(分子量:3000-30000Da)混合样的毛细管凝胶电泳分析
图1. 五个小RNA的毛细管凝胶电泳紫外吸收图
2) QDL 2,000 Quantitative DNA Marker的毛细管凝胶电泳分析
QDL2,000 Quantitative DNAMarker浓度约460 ng/5μL,适用于不同浓度DNA片段的相对定量。本制品为已含有1×Orange G Loading的DNA溶液。Orange G色素的迁移速度和25 bp的双链线型DNA相近 (3% TAE电泳时)。该Marker由DNA片段2,000 bp、1,000 bp、750 bp、500 bp、250 bp以及100 bp组成,5μL电泳时每条带DNA量分别为200 ng、100 ng、75 ng、50 ng、25 ng及10 ng。
图2. QDL2,000Quantitative DNA Marker的毛细管凝胶电泳紫外吸收图
4. 结论
使用通微CE-1000毛细管电泳系统,配备紫外检测器,可以分别用不同的CE凝胶实现客户提供的5种人工合成小RNA片段(3000-30000Da)的分离以及市售的100-2000bp的QDL2,000 Quantitative DNA Marker分离分析。该方法精确、灵敏度高,能满足日常分析检测的要求。同时,RNA/DNA标记物可以提供片段长度。此外,激光诱导荧光可以提供更高的分辨率,您也可以从上海通微订购激光诱导荧光检测器。
5. 配制列表
推荐仪器配制 | CE-1000毛细管电泳系统 (标配高压电源和UV检测器, 选配激发波长488nm/发射波长525nm的LIF检测器) |
TSI毛细管烧结器 | |
Unimicro ChromStation 色谱工作站 |